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如何正確的使用紙色譜法分析樣品

2022-11-10 15:13:36 admin
 【化工儀器網 行業百態】紙色譜法又稱紙層析法,是用紙作為載體,通過分裂係的在同一介質中分散速度不同來分析樣品成分的色譜法,具有微量、快速、高效和敏捷度高等特點。從原理上來說,紙色譜涉及分配、吸附和離子交換等機理,相對複雜,但是分配機理起主要作用,因此紙色譜法屬於分配色譜。
 
  由於紙色譜法適用於多官能團或高極性的親水化合物如醇類、羥基酸、氨基酸、糖類和黃酮類等化合物的分離檢驗,因此在岩礦分析與鑒定以及藥品檢測領域有較為廣泛的應用。
 
  其中,用於藥品檢測時根據檢測內容的不同,采取的措施也不同。具體來說,當采用紙色譜法進行藥品鑒別時,供試品在色譜圖中所顯主斑點的位置與顏色(或熒光),應與對照標準物質在色譜圖中所顯主斑點相同;進行藥品純度檢查時,取一定量的供試品,經展開後,按各品種項下的規定,檢視其所顯雜質斑點的個數和呈色深度(或熒光強度);進行藥品含量測定時,將待測色譜斑點剪下經洗脫後,再用適宜的方法測定。
 
  紙色譜法的準備工作
 
  紙色譜法根據操作方法的不同又可以分為上行法與下行法,不過用到的儀器和材料大同小異。
 
  進行紙色譜分析前應準備好展開容器(通常為圓形或長方形玻璃缸,缸上具有磨口玻璃蓋,應能密閉)、點樣器、色譜濾紙。其中點樣器需要保證能使點樣位置正確、集中,一般采用平口微量注射器或定量毛細管(無毛刺);而色譜濾紙需做到質地均勻平整,具有一定機械強度不含影響展開效果的雜質,也不會與所用顯色劑起作用,以免影響分離和鑒別效果,必要時可進行處理後再用。
 
  而在進行上行法時,需要在展開容器蓋上的孔中加塞,塞中插入玻璃懸鉤,以便將點樣後的色譜濾紙掛在鉤上,並除去溶劑槽和支架,並且使用的色譜濾紙長控製在 25cm左右,寬度則按需要而定,必要時可將色譜濾紙卷成筒形,點樣基線距底邊約 2.5cm。
 
  進行下行法時,需要在支架架起展開容器,並用玻棒壓住色譜濾紙,同時,色譜紙按纖維長絲方向切成適當大小的紙條,使色譜濾紙上端能足夠浸入溶劑槽內的展開劑中,並使點樣基線能在溶劑槽側的玻璃支持棒下數厘米處,必要時,可在色譜濾紙下端切成鋸齒形便於展開劑向下移動。
 
  紙色譜法的操作方法
 
  進行紙色譜法時,應先將供試品溶解於適宜的溶劑中製成一定濃度的溶液,然後用微量注射器或定量毛細管吸取溶液,點於點樣基線上,一次點樣量不超過 10µl。
 
  如果采用的是上行法,則應該在展開容器中加入適量展開劑,靜置至展開劑蒸氣飽和後,再下降懸鉤,使色譜濾紙浸入展開劑約 1cm,展開劑即經毛細作用沿色譜濾紙上升,除另有規定外,一般展開至約 15cm 後,取出晾幹,按規定方法檢視。展開可以單向展開,即向一個方向進行;也可進行雙向展開,即先向一個方向展開、取出,待展開劑完全揮發後,將濾紙轉動 90°,再用原展開劑或另一種展開劑進行展開。亦可多次展開和連續展開等。
 
  如果采用下行法,則應該將點樣後的色譜濾紙的點樣端放在溶劑槽內並用玻棒壓住,使色譜濾紙通過槽側玻璃支持棒自然下垂,點樣基線在壓紙棒下數厘米處。展開前,展開缸內用各品種項下規定的溶劑的蒸氣使之飽和,一般可在展開缸底部放一裝有規定溶劑的平皿,或將被規定溶劑潤濕的濾紙條附著在展開缸內壁上,放置一定時間,待溶劑揮發使缸內充滿飽和蒸氣。然後小心添加展開劑至溶劑槽內,使色譜濾紙的上端浸沒在槽內的展開劑中。展開劑即經毛細作用沿色譜濾紙移動進行展開,展開過程中避免色譜濾紙受強光照射,展開至規定的距離後,取出色譜濾紙,標明展開劑前沿位置,待展開劑揮散後,按規定方法檢測色譜斑點。


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